科研项目
X染色体失活(偏移)实验
X染色体失活(偏移)实验原理和方法简介(DDX3X基因)
DDX3X基因位于染色体Xp11.4, 编码保守的含662个氨基酸的DEAD-box RNA解旋酶(DEAD-box RNA helicase 3),在细胞转录、剪接、RNA转运和翻译等过程中起重要作用。X染色体上基因的半合子突变,在男性X连锁遗传病中总是表达,女性因存在2条X染色体,因此,另一条正常等位基因的补偿或因大多数细胞中的突变X染色体失活(偏移,Skewed X inactivation)而通常不受或轻度受影响。DDX3X基因位于X染色体可以逃逸X染色体失活区域(Escape X-chromosome inactivation),是能够逃逸X染色体失活的基因之一,其基因突变导致的遗传病通常在女性患者中有显著的变异性,大多数逃逸X失活的转录本并未从失活的X染色体中完全表达,这意味着逃逸通常是部分性的和不完整的。表型严重程度可受女性DDX3X基因表达量的影响,即可能会受到偏移X染色体失活或逃逸不完全的影响。X染色体DDX3X基因座单倍体不足可能在男性中是致命的,因此多数患者为女性。
X染色体失活(偏移)实验流程:
限制性内切酶HpaII和 HhaI切基因组DNA,没有甲基化的X染色体被切开,甲基化的失活X染色体不能被切开→ PCR扩增没有切开的失活X染色体→ PAGE (polyacrylamide gel electrophoresis) → 银染→ Quantity One software半定量分析。
染色体失活(偏移)实验原理示意图